精品嫩草98AV在线观看

热门搜索:贰尝滨厂础试剂盒,生化试剂,耗材,生物化学品,抗体
产物分类

Product category

技术文章 / article 您的位置:精品嫩草98AV在线观看 > 技术文章 > 赤霉素 (GA1) 液相检测|茁彩生物

赤霉素 (GA1) 液相检测|茁彩生物

发布时间: 2025-11-24  点击次数: 10次

赤霉素 (GA1) 是赤霉素类植物激素(Gibberellins,简称 GAs)家族中最早被发现且生理活性核心的成员之一,属于四环二萜类化合物,广泛存在于高等植物(尤其是单子叶植物)、部分藻类及真菌中,是调控植物茎秆生长、种子萌发等关键生理过程的核心信号分子。


从化学结构来看,GA1 的分子骨架同样以 “赤霉烷" 为核心(含 A、B、C、D 四个环),分子式为 C??H??O?,分子量为 332.39。与同家族的 GA5、GA4 相比,GA1 的结构特点是在 A 环和 C13 位均带有羟基(-OH)——A 环羟基决定其基础活性,C13 位羟基则使其在单子叶植物中的活性显著高于其他亚型。在植物体内,GA1 的合成以 GA12 为前体,经 GA53、GA44 等中间产物,通过 “早期 13 - 羟化途径" 生成,是多数单子叶植物(如水稻、小麦、玉米)体内最主要的活性赤霉素,主要在茎尖分生组织、根尖及发育中的胚乳中合成,通过木质部向上运输至茎秆,或通过韧皮部运输至种子,调控特定生理过程。

赤霉素家族虽包含 130 余种成员,但 GA1 与 GA4、GA5 并列为 “三大核心活性赤霉素",且 GA1 的活性具有明显的 “物种特异性":在单子叶作物中,GA1 的活性远高于 GA5,是调控茎秆伸长的 “主导激素";而在部分双子叶植物(如豌豆、拟南芥)中,GA1 与 GA4 协同发挥作用,共同维持植物生长平衡。此外,GA1 的半衰期较短(约 24 小时),在植物体内会快速被氧化为无活性的 GA8,通过这种 “合成 - 降解平衡",精准调控其体内浓度,避免生理功能紊乱。


生理功能

GA1 的生理功能围绕 “调控植物纵向生长、种子发育及逆境适应" 展开,尤其在单子叶作物的茎秆发育、倒伏抗性及种子萌发中发挥不可替代的作用,具体可概括为以下四点:

1. 调控单子叶作物茎秆伸长,决定株高与倒伏抗性

这是 GA1 最核心且研究最充分的生理功能。在水稻、小麦、玉米等单子叶作物中,茎秆的纵向生长(节间伸长)几乎*依赖 GA1 的调控:一方面,GA1 可激活茎秆细胞内的 “扩张蛋白" 和 “木葡聚糖内糖基转移酶",前者破坏细胞壁纤维素微纤丝间的氢键,使细胞壁松弛,为细胞吸水膨胀提供空间;后者则通过修饰细胞壁结构,增强细胞壁的延展性,进一步促进细胞伸长。另一方面,GA1 能上调细胞周期蛋白(如 Cyclin D3)的表达,加速细胞从 G1 期向 S 期过渡,促进细胞分裂,增加节间细胞的数量,从而实现茎秆的纵向生长。

GA1 的浓度直接决定作物的株高与倒伏抗性:当 GA1 合成过多(如水稻 “恶苗病" 病菌分泌 GA1 类似物)时,会导致茎秆过度伸长,节间细弱,抗倒伏能力显著下降;而 GA1 合成不足(如小麦 “矮化突变体")时,茎秆矮小,虽抗倒伏但可能影响光合效率和结实率。在农业生产中,通过调控 GA1 含量可实现 “理想株型" 培育 —— 例如,水稻 “半矮化品种" 的培育,正是通过降低 GA1 的合成量,使株高控制在 80-100cm,既保证抗倒伏能力,又不影响产量。

2. 促进种子萌发,打破休眠并调控萌发速率

GA1 是种子萌发过程中的 “关键启动信号",尤其在单子叶作物种子(如小麦、大麦)中,其作用机制与胚乳的 “糊粉层" 密切相关:种子吸水后,胚合成并分泌 GA1,GA1 通过扩散进入糊粉层细胞,激活 “α- 淀粉酶"“β- 淀粉酶"“蛋白酶" 等水解酶的基因表达;这些水解酶分泌到胚乳中,将淀粉分解为葡萄糖,蛋白质分解为氨基酸,为胚的生长(胚根伸长、胚芽突破种皮)提供能量和营养。

此外,GA1 还能打破种子的 “休眠壁垒":对于因低温、干旱导致休眠的种子(如小麦越冬后的种子),GA1 可通过下调 “脱落酸(ABA)受体基因" 的表达,降低种子对 ABA 的敏感性(ABA 是抑制萌发的激素),从而解除休眠,促进萌发。在生产实践中,小麦、玉米播种前喷施低浓度 GA1,可显著提高种子在低温、干旱条件下的萌发率,缩短萌发时间,确保苗齐苗壮。

3. 调控叶片发育与光合效率

GA1 对植物叶片的形态建成和光合效率具有重要调控作用。在单子叶作物中,GA1 可促进叶片的纵向伸长(叶片变长),增加叶片的受光面积;同时,GA1 能延缓叶片的衰老 —— 通过抑制叶片中 “叶绿素酶" 和 “蛋白酶" 的活性,减少叶绿素降解和蛋白质流失,延长叶片的功能期(光合功能可持续时间)。例如,在小麦灌浆期,GA1 含量较高的植株,旗叶(最上部叶片,对灌浆贡献最大)的叶绿素含量下降缓慢,光合速率维持在较高水平,可显著提高灌浆效率,增加千粒重。

在双子叶植物中,GA1 的作用略有不同:它可调控叶片的 “开展角度",例如在豌豆中,GA1 可促进叶柄伸长,使叶片开展更充分,避免叶片相互遮挡,提升群体的光合效率。此外,GA1 还能促进叶片中 “Rubisco 酶"(光合碳同化的关键酶)的合成,直接提升叶片的光合能力。

4. 参与逆境响应,平衡生长与胁迫耐受性

与 GA5 类似,GA1 也能通过调节自身含量及与其他激素的平衡,参与植物对逆境(如低温、盐胁迫、病虫害)的响应,但作用机制具有 “双向性":

低温胁迫下,植物体内 GA1 的合成会暂时减少(通过抑制 GA1 合成关键酶 “GA3 氧化酶" 的活性),同时 ABA 含量升高。这种 “GA1/ABA 比值下降" 的状态,可使植物进入 “抗冻模式"—— 一方面,GA1 减少导致茎秆伸长受抑,植株生长缓慢,减少能量消耗;另一方面,GA1 可通过上调 “冷响应基因"(如小麦的 TaCOR14b 基因)的表达,促进脯氨酸、可溶性糖等渗透调节物质的积累,增强细胞的抗冻能力,避免低温导致的细胞结冰损伤。

盐胁迫下,GA1 的作用呈现 “浓度依赖性":轻度盐胁迫时,GA1 含量适度升高,通过促进根系生长(增加根长和根表面积),提升根系对水分和养分的吸收能力,缓解盐胁迫导致的 “生理干旱";

重度盐胁迫时,GA1 含量显著下降,与 ABA 协同抑制地上部生长,将养分优先分配给根系和生殖器官,确保植物的生存和繁殖。此外,GA1 还能通过促进 “抗氧化酶"(如 SOD、POD)的活性,清除盐胁迫产生的活性氧,减少细胞膜的脂质过氧化损伤。

GA1 与 GA5 同属赤霉素家族,化学结构相似(均为四环二萜类),因此茁彩生物采用与 GA5 检测原理一致的 “高效液相色谱(HPLC)法",但通过优化色谱条件(如流动相比例、检测波长),实现 GA1 的特异性分离与定量,具体过程可分为以下四步:

1. 样品前处理:提取与纯化 GA1

植物样品中 GA1 的含量极低(通常为 ng/g 级),且含有叶绿素、多糖、脂质、其他赤霉素(如 GA8、GA4)等杂质,需通过前处理实现 GA1 的富集与纯化,步骤与 GA5 类似,但需注意 GA1 的稳定性(对光和氧化更敏感):

提取:将样品(如水稻茎尖、小麦种子)冷冻干燥后研磨成粉末,加入预冷的 “80% 甲醇水溶液(含 0.1% 甲酸 + 0.01% 抗坏血酸)",抗坏血酸可进一步抑制 GA1 的氧化;在 4℃避光条件下振荡提取 24-36 小时(GA1 在植物组织中结合更紧密,需延长提取时间),确保 GA1 充分溶解。

脱脂与除杂:提取液经 8000×g 离心 15 分钟,取上清液,加入正己烷(体积比 1:1)进行液 - 液萃取,去除脂质类杂质;随后通过 “固相萃取柱(SPE 柱)" 纯化 —— 采用 “C18-SPE 柱 + NH2-SPE 柱" 串联,先通过 C18 柱吸附 GA1(去除水溶性杂质),再通过 NH2 柱进一步去除酸性杂质(如有机酸),最后用 “60% 甲醇水溶液(含 0.05% 甲酸)" 洗脱 GA1,收集洗脱液。

浓缩与定容:洗脱液用氮气(40℃以下)缓慢吹干(避免高温导致 GA1 降解),加入少量 HPLC 流动相溶解,过 0.22μm 有机相滤膜,得到待测样品溶液。

前处理的关键在于 “低温、避光、抗氧剂保护",防止 GA1 在提取过程中被氧化为无活性的 GA8,确保检测结果的准确性。

2. HPLC 色谱分离:基于结构差异实现 GA1 特异性分离

茁彩生物采用反相 C18 色谱柱(如 Waters XBridge C18,4.6×250mm,5μm),通过优化流动相梯度,实现 GA1 与其他赤霉素(如 GA4、GA5、GA8)及杂质的*分离:

流动相组成:采用 “乙腈(A 相)-0.1% 甲酸水溶液(B 相)"(乙腈比甲醇对 GA1 的洗脱选择性更强),梯度洗脱程序为:初始阶段 A 相 25%、B 相 75%,维持 5 分钟;随后在 18 分钟内将 A 相升至 75%、B 相降至 25%;维持 4 分钟后,快速回到初始比例平衡色谱柱(2 分钟)。

色谱条件:柱温控制在 35℃(GA1 在 35℃下色谱峰形更对称),流速 1.0mL/min,进样量 10μL。在该条件下,GA1 的保留时间(Rt)通常为 10-12 分钟,与 GA4(Rt≈8.5 分钟)、GA5(Rt≈13.5 分钟)、GA8(Rt≈15 分钟)的保留时间差异显著,可实现*分离,避免交叉干扰。

分离机制仍基于 “疏水作用":GA1 分子中的四环骨架(疏水基团)与 C18 色谱柱固定相结合,而流动相中的乙腈通过竞争结合,减弱 GA1 与固定相的相互作用;由于 GA1 的羟基数量(2 个)多于 GA4(1 个)、少于 GA8(3 个),其疏水性介于两者之间,因此保留时间处于中间位置,实现特异性分离。

3. 检测器定量:紫外吸收法精准测定 GA1 含量

GA1 分子中的共轭双键(四环中的 C=C 键)在紫外光区具有特征吸收,茁彩生物采用二极管阵列检测器(顿础顿)&苍产蝉辫;,在208nm波长下检测 GA1 的吸光值(GA1 在 208nm 处有最大吸收,摩尔吸光系数约为 1.3×10? L?mmol???cm??),定量过程如下:

定性确认:GA1 从色谱柱洗脱后,DAD 记录其 “紫外吸收光谱"(200-400nm),GA1 的特征吸收峰为 208nm 和 235nm(肩峰),通过与 GA1 标准品的吸收光谱比对,可确认样品中 GA1 的真实性,避免杂质峰干扰。

定量计算:根据 GA1 色谱峰的 “峰面积" 进行定量 —— 配置 5 个浓度梯度的 GA1 标准品(0.1ng/mL、0.5ng/mL、1ng/mL、5ng/mL、10ng/mL),分别进样检测,绘制 “浓度 - 峰面积" 标准曲线(R?≥0.999);待测样品进样后,根据其 GA1 色谱峰的峰面积,从标准曲线上查得对应的浓度。

与 GA5 检测相比,GA1 的检测波长略低(GA5 为 210nm),这是由于 GA1 的 C13 位羟基增加了分子的极性,导致其最大吸收波长略有蓝移,需通过调整波长提升检测灵敏度。

4. 结果计算:GA1 含量的最终换算

GA1 的含量通常以 “ng/g 鲜重" 或 “ng/g 干重" 表示,计算步骤与 GA5 一致,具体如下:

第一步:根据标准曲线查得待测样品溶液中 GA1 的浓度(c,单位:ng/mL);

第二步:计算样品中 GA1 的总质量(m):m = c × V × D(V 为待测样品溶液定容体积,单位:mL;D 为前处理稀释倍数,包括提取溶剂体积 / 样品质量、SPE 洗脱浓缩倍数);

第叁步:计算样品中 GA1 的含量(C):C = m / M(M 为样品初始质量,单位:g;鲜重样品需测定含水量,换算为干重以消除水分干扰)。

示例:取 2g 鲜重水稻茎尖样品,冷冻干燥后质量为 0.2g,经提取、纯化后定容至 1mL,标准曲线查得浓度为 2ng/mL,稀释倍数为 20,则 GA1 含量 = 2ng/mL × 1mL × 20 / 0.2g = 200ng/g 干重。

这种检测方法的优势在于:

高特异性:通过优化流动相和色谱柱,实现 GA1 与其他赤霉素及杂质的*分离,结合紫外光谱比对,定性准确性达 99% 以上;

高灵敏度:检测限低至 0.05ng/mL,可准确检测单子叶作物中 ng/g 级的 GA1(如小麦茎秆中 GA1 含量通常为 5-50ng/g 干重);

高重复性:保留时间和峰面积的相对标准偏差(RSD)小于 3%,结果稳定可靠;

适用性广:可用于水稻、小麦、玉米等单子叶作物的茎秆、种子、叶片,及豌豆、拟南芥等双子叶植物的组织样品,也可用于植物激素制剂中 GA1 含量的检测,为作物育种(株高调控)、种子萌发研究及农药残留检测提供关键技术支持。


  • 联系电话电话021-65681082
  • 传真传真
  • 邮箱邮箱2820057736@
  • 地址公司地址上海市杨浦区航都路18号
© 2025 版权所有:精品嫩草98AV在线观看   备案号:   sitemap.xml   &苍产蝉辫;&苍产蝉辫;&苍产蝉辫;技术支持:       
  • 公众号二维码